寵物檢測PCR儀主要由控溫系統(tǒng)、反應(yīng)體系和檢測系統(tǒng)組成。在反應(yīng)體系中，加入指定的引物、DNA聚合酶、脫氧核苷酸三磷酸(dNTPs)以及緩沖液等成分。引物是一段與目標(biāo)核酸序列互補(bǔ)的短單鏈DNA片段，它能特異性地識別并結(jié)合到目標(biāo)核酸的兩端。
 

　　PCR過程分為三個(gè)主要步驟：變性、退火和延伸。在變性步驟中，PCR儀通過高溫(通常為94 -96℃)使雙鏈DNA解旋，變成單鏈DNA，這一步是為了打開DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)，使得引物能夠與目標(biāo)序列結(jié)合。接著進(jìn)入退火步驟，溫度降低(一般控制在50 -65℃之間，具體溫度取決于引物的堿基組成和長度)，此時(shí)引物會(huì)與模板DNA上的目標(biāo)序列特異性結(jié)合，形成局部的雙鏈結(jié)構(gòu)。延伸步驟，溫度升高到72℃左右，DNA聚合酶以引物為起點(diǎn)，按照堿基配對原則，將dNTPs逐個(gè)添加到引物的3'端，合成新的DNA鏈，從而使目標(biāo)DNA片段得到擴(kuò)增。
 

　　這三個(gè)步驟構(gòu)成一個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)結(jié)束后，目標(biāo)DNA的數(shù)量理論上會(huì)翻倍。經(jīng)過多個(gè)循環(huán)(通常為25 -40個(gè)循環(huán))，目標(biāo)DNA片段就會(huì)被大量擴(kuò)增，從而可以通過檢測系統(tǒng)對其進(jìn)行定性或定量分析。檢測系統(tǒng)可以采用多種方法，如熒光染料法、熒光探針法等。熒光染料法是基于在PCR過程中，雙鏈DNA結(jié)合熒光染料后會(huì)發(fā)出熒光，且熒光強(qiáng)度與DNA的含量成正比的原理；熒光探針法則利用特異性的熒光探針與目標(biāo)序列結(jié)合，在PCR擴(kuò)增過程中產(chǎn)生熒光信號變化，從而實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)核酸的準(zhǔn)確檢測。
 

　　寵物檢測PCR儀的使用注意事項(xiàng)：
 

　　1.環(huán)境要求：將PCR儀放置在平穩(wěn)、干燥、通風(fēng)良好且溫度相對恒定的環(huán)境中，避免陽光直射、靠近熱源或濕度較大的地方。
 

　　2.電源檢查：確認(rèn)所使用的電源電壓符合PCR儀的額定要求，并且要有可靠的接地。
 

　　3.樣品準(zhǔn)備規(guī)范：確保待檢測的核酸樣本提取質(zhì)量合格，樣本中不應(yīng)有雜質(zhì)、抑制物等影響PCR反應(yīng)的物質(zhì)；同時(shí)，準(zhǔn)確配制反應(yīng)體系，對引物、酶、dNTP等各種試劑的量要準(zhǔn)確量取和添加，并且要保證操作過程的無菌，防止樣本和試劑被污染。
 

　　4.參數(shù)設(shè)置準(zhǔn)確：根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜆颖绢愋?，?zhǔn)確設(shè)置PCR反應(yīng)的各階段溫度(如變性溫度、退火溫度、延伸溫度等)、時(shí)間以及循環(huán)次數(shù)等參數(shù)。
 

　　5.避免頻繁開關(guān)艙門：在PCR反應(yīng)進(jìn)行期間，盡量減少不必要地打開儀器艙門的次數(shù)，因?yàn)槊看伍_門都會(huì)使儀器內(nèi)部溫度發(fā)生變化，影響熱循環(huán)的穩(wěn)定性。
 

　　6.運(yùn)行狀態(tài)監(jiān)測：在PCR儀運(yùn)行過程中，要留意觀察儀器的運(yùn)行狀態(tài)指示燈等，確保儀器正常運(yùn)轉(zhuǎn)。
 

　　7.及時(shí)清理：使用完畢后，待儀器冷卻，對儀器表面及內(nèi)部可清潔的部位進(jìn)行適當(dāng)清潔。
 

　　8.定期校準(zhǔn)和維護(hù)：按照儀器廠家建議的周期，定期對PCR儀進(jìn)行校準(zhǔn)，確保溫度控制、時(shí)間控制等各項(xiàng)功能的準(zhǔn)確性。